Walang asawa-gene ang pagtatasa ay isang naka-target na pamamaraan ng pagsusuri ng genetiko.
Sa loob ng balangkas ng pamamaraang ito, kung ang isang namamana na sakit ay pinaghihinalaan, na kung saan ay sanhi ng isang solong pagbabago sa a gene, ang gen na pinaghihinalaang bilang sanhi ay nasusuri. Madalas din itong ginagawa nang regular bilang bahagi ng mga pagsusuri sa pag-screen.
Mga Indikasyon (mga lugar ng aplikasyon)
- Diagnosis ng mga sakit na monogenic hal cystic fibrosis.
ang pamamaraan ay
Kailangan ng materyal
- Heparin dugo (minimum 1-2 ml)
Paghahanda ng pasyente
- Hindi kinakailangan
Nakagagambalang kadahilanan
- Walang alam
Ang pamamaraan ng laboratoryo
Kadalasan, ang pamamaraan ng pagsunud-sunod na ginamit sa solong-gene Ang pagsusuri ay ang pamamaraan ng Sanger, na tinatawag ding synthesis ng chain termination, kung saan unang dumating sa paghihiwalay ng DNA mula sa dugo. Tapos, lahat Hydrogenation ang mga bono na nagsisilbing hawakan ng magkadikit na DNA ay nasira. Pagkatapos ng pag-init sa 94-96 ° C sa loob ng isang minuto, naroroon ang dalawang solong mga hibla. Susunod, nangyayari ang tinatawag na primer hybridization, kung saan nakakabit ang isang panimulang aklat. Ito ay nagaganap sa halos 60 ° C. Ang panimulang aklat ay isang oligonucleotide (oligomer na binubuo ng ilang mga nucleotide) na nagsisilbing panimulang punto para sa pagtitiklop ng DNA enzymes tulad ng DNA polymerase. Pagkatapos ng panimulang hybridization, magaganap ang extension, kung saan ang temperatura ay tumaas sa 72 ° C. Pinapayagan nitong mag-attach ang panimulang aklat sa DNA polymerase (enzymes na synthesize DNA). Pagkatapos ng isang average ng 30 cycle, ang pamamaraan ay maaaring tumigil.
Ang karagdagang pagsusuri ay ginaganap ng maliliit na ugat electrophoresis sa mga awtomatikong tagasunod. Ang resulta ay tinatawag na isang electropherogram. Ipinapakita nito ang iba't ibang mga kulay na nagpapahiwatig ng pagkakasunud-sunod ng base.
Sa pamamaraang ito, ang mga mutasyon na kinasasangkutan lamang ng isang solong base ng nucleic sa loob ng isang gen, na kilala rin bilang mga mutation ng point, ay maaaring napansin.
