Pagsunud-sunod ng DNA | Deoxyribonucleic acid - DNA

DNA sequencing

Sa pagsunud-sunod ng DNA, ginagamit ang mga pamamaraan ng biochemical upang matukoy ang pagkakasunud-sunod ng mga nucleotide (DNA base Molekyul na may asukal at pospeyt) sa isang Molekyul ng DNA. Ang pinakalawak na ginagamit na pamamaraan ay ang paraan ng pagwawakas ng chain ng Sanger. Dahil ang DNA ay binubuo ng apat na magkakaibang mga base, apat na magkakaibang diskarte ang ginawa.

Ang bawat diskarte ay naglalaman ng DNA na maiuugnay, isang panimulang aklat (panimulang molekula para sa pagkakasunud-sunod), DNA polymerase (enzyme na umaabot sa DNA) at isang halo ng lahat ng apat na kinakailangang mga nucleotide. Gayunpaman, sa bawat isa sa apat na pamamaraang ito ang isang iba't ibang base ay binago ng kemikal sa isang paraan na maaari itong isama ngunit hindi nagbibigay ng isang punto ng pagkilos para sa DNA polymerase. Pagkatapos ay hahantong ito sa pagwawakas ng kadena. Ang pamamaraang ito ay gumagawa ng mga fragment ng DNA na magkakaiba ang haba, na pagkatapos ay pinaghiwalay ng chemically ng tinaguriang gel electrophoresis ayon sa kanilang haba. Ang nagreresultang pag-uuri ay maaaring isalin sa pagkakasunud-sunod ng mga nucleotide sa seksyon ng seksyon ng DNA sa pamamagitan ng paglalagay ng label sa bawat base na may iba't ibang kulay na fluorescent.

Hybridization ng DNA

Ang DNA hybridization ay isang molekular genetic na pamamaraan na ginamit upang patunayan ang pagkakapareho ng dalawang solong hibla ng DNA na magkakaibang pinagmulan. Ginagamit ng pamamaraang ito ang katotohanang ang isang dobleng strand ng DNA ay palaging binubuo ng dalawang pantulong na solong mga hibla. Ang mas magkatulad na parehong solong mga hibla ay sa bawat isa, mas maraming mga base ay bumubuo ng isang solidong koneksyon (mga hydrogen bond) na may kabaligtaran na base o mas maraming mga pares ng base ang nabuo.

Walang mga pagpapares ng base ang magaganap sa pagitan ng mga seksyon sa dalawang mga hibla ng DNA na may iba't ibang pagkakasunud-sunod ng base. Ang kamag-anak na bilang ng mga compound ay maaaring matukoy ngayon sa pamamagitan ng pagtukoy ng natutunaw na punto kung saan ang bagong nabuo na DNA double strand ay pinaghiwalay. Ang mas mataas na natutunaw na punto, mas maraming mga pantulong na base ay nabuo ang mga hydrogen bond sa bawat isa at mas katulad ang dalawang solong mga hibla. Ang pamamaraang ito ay maaari ding magamit upang makita ang isang tukoy na pagkakasunud-sunod ng base sa isang pinaghalong DNA. Para sa layuning ito, ang mga artipisyal na nabuo na mga fragment ng DNA ay maaaring lagyan ng label na (fluorescent) tina. Ang mga ito pagkatapos ay maghatid upang markahan ang kaukulang pagkakasunud-sunod ng base at sa gayon ay gawin itong nakikita.