Ang situ hybridization ay isang pamamaraan para sa pagtuklas ng mga aberrasyong chromosomal. Nagsasangkot ito ng tukoy sa pag-label chromosomes may flouroscent tina at nagbubuklod sa kanila sa isang pagsisiyasat sa DNA. Ang pamamaraan na ito ay ginagamit para sa diagnosis ng prenatal ng mga mutasyon ng genetiko.
Ano ang hybridization ng situasyon?
Ang situ hybridization ay nagsasangkot ng tukoy sa pag-label chromosomes may flouroscent tina at nagbubuklod sa kanila sa isang pagsisiyasat sa DNA. Ang pamamaraang ito ay ginagamit para sa diagnosis ng prenatal ng gene mutasyon In situ hybridization o fluorescence sa situ hybridization nagsasangkot ng molekular genetic detection ng mga nucleic acid mula sa RNA o DNA sa mga tukoy na tisyu o isang cell. Karaniwan, ang ganitong uri ng mga diagnostic ay ginagamit upang makita ang isang istruktura o bilang na hindi normal na chromosomal sa pagbubuntis. Para sa layuning ito, ginagamit ang isang artipisyal na ginawa na probe, na kung saan mismo ay binubuo ng nucleic acid. Pagkatapos ay nagbubuklod ito sa mga nucleic acid sa organismo sa pamamagitan ng base pairing. Ang pagbubuklod na ito ay tinukoy ng term na hybridization. Isinasagawa ang pagtuklas sa istruktura ng pamumuhay ng pasyente at samakatuwid ay tumutugma sa pagtuklas ng situasyon. Upang makilala mula dito ay mga in vitro na pamamaraan, kung saan ang pagtuklas ay nagaganap sa test tube. Ang pamamaraan ay binuo noong ika-20 siglo ng mga siyentista na sina Joe Gall at Mary Lou Pardue. Ang pamamaraan ay nagbago mula noon. Halimbawa, habang ginamit ang mga radioactive na probe noon, ang mga probisk na may label na flouroscence na may isang covalent bond sa pag-label molecule ginagamit ngayon.
Pag-andar, epekto, at mga target
Ang situ hybridization ay karaniwang ginagamit upang makita ang mga aberrasyon ng chromosomal, mga abnormalidad ng chromosomal na hindi napansin sa isang karyogram. Kaya, ang pamamaraan ay palaging ginagamit kapag ang mga sakit na namamana ay maaaring matukoy sa panahon pagbubuntis. Yamang ang mga chromosomal aberrations ay isang problema na hindi dapat maliitin ngayon, ang aplikasyon ng pamamaraan ay nadagdagan sa paglipas ng panahon. Isinasagawa ang hybridization gamit ang mga katutubong cell mula sa ina amniotic fluid. Ang batayan ng pamamaraan ay ang pagbubuklod ng kulay na may label na pagsisiyasat sa mga fragment ng DNA. Salamat sa umiiral, ang isang mikroskopyo ay maaaring magamit sa paglaon upang suriin ang bilang ng mga kopya, dahil ang mga indibidwal na kopya ay naglalabas ng isang ilaw na signal at sa gayon ay maaaring makita sa ilalim ng mikroskopyo. Mayroong iba't ibang mga pamamaraan para dito. Alinman sa pag-aaral ay maganap kaagad pagkatapos ng pagbuklod. Sa kasong ito, ang isang pangulay na pang-flouroscence tulad ng biotin ay ginagamit, na kung saan ay nakasalalay nang direkta sa pagsisiyasat ng DNA. Sa hindi direktang paraan ng in situ hybridization, ang pagtatasa ay hindi maisasagawa kaagad pagkatapos ng hybridization dahil ang mga fluorescent na sangkap ay maaaring maiugnay sa pagsisiyasat pagkatapos lamang ng hybridization. Ang hindi direktang pamamaraang ito ay mas karaniwang ginagamit kaysa sa direktang pamamaraan sapagkat ito ay itinuturing na mas sensitibo. Kasama sa mga diskarte ang mga chromosome-specific na centrometer na mga pagsisiyasat ng DNA, mga locus na tukoy sa locus, mga pagsusuri sa library ng DNA na partikular sa chromosome, at mga paghahambing na hybrid na genome. Maaaring magamit ang mga chromomome-tiyak na centromere DNA probe upang matukoy ang mga chromosomal na bilang na abnormalidad. Iyon ay, pangunahing ginagamit ang mga ito kapag dinoble o tinanggal chromosomes ay pinaghihinalaan. Ang mga lokal na lokal na probe ng DNA ay higit na angkop para sa pagtuklas ng kaunting mga mutasyon na hindi napansin sa karyogram. Ginagamit ang isang partikular na chromosome na DNA probe sa library upang tuklasin ang mga pagpasok at paglipat. Ang paghahambing ng genome hybridization, sa kabilang banda, ay isang komprehensibong pagsusuri ng pagkalugi at mga nakuha sa materyal na chromosomal. Ngayon, ang situ hybridization ay may malaking kahalagahan sa loob ng mga diagnostic ng iba`t ibang mga chromosomal mutation. Sa mga diagnostic ng Down Syndrome, halimbawa, ang mga probe ay nagbubuklod sa chromosome 21. Para sa layuning ito, karaniwang ginagamit ang mga chromosome-specific na probe, na maaaring mailapat sa mga kaso ng hinala ng sakit na ito. Ang isang hinala ay maaaring lumitaw, halimbawa, kung ang mga magulang ay dati nang nanganak ng isang anak na may sakit at ang ultratunog kapansin-pansin ang imahe. Kung mayroong isang triple sa halip na isang dobleng kurbatang, na nagreresulta sa isang triple signal ng kulay, ang diagnosis ay itinuturing na nakumpirma.
Mga panganib, epekto, at panganib
Hindi tulad ng PCR, halimbawa, ang situ hybridization ay mas madaling kapitan sa kontaminasyon. Bilang karagdagan, ang oras na kinakailangan para sa pamamaraan ay mas kaunti. Gayunpaman, dahil ang mga embryo sa partikular na form na mga pattern ng chromosomal, ang anumang pattern na naroroon ay hindi maaaring gamitin upang mapaghihinuhang may katiyakan ang natitirang chromosomal pamamahagi at sa gayon ang katayuan ng genetiko ng iba pang mga cell. Ang mga signal ng kulay ay maaari ring mag-overlap o manatiling hindi nakikita para sa iba pang mga kadahilanan. Kaya, sa situ hybridization bilang isang diagnostic tool habang pagbubuntis ay medyo madaling kapitan ng error. Maaaring mangyari ang mga maling diagnosis at maaaring magpasya ang mga magulang laban sa isang malusog embrayo. Upang mabawasan ang error-proneness ng in situ hybridization, hindi bababa sa dalawang mga embryonic cell ang dapat suriin nang sabay-sabay. Sa pamamagitan ng pagsusuri sa dalawang mga cell nang kahanay, mayroon lamang isang napabayaang peligro ng maling diagnosis. Samakatuwid ang mga magulang ay maaaring umasa sa diagnosis sa naturang kaso. Hindi inalok ang hybridization ng situ sa bawat buntis, ngunit sa mga kababaihan lamang mula sa isang panganib na pangkat. Gayunpaman, ang mga buntis na kababaihan ay hindi tinanggihan ang ganitong uri ng diagnosis sa kanilang sariling kahilingan. Hindi normal ultratunog ang mga natuklasan o isang abnormal na suwero ay maaaring mag-udyok sa isang manggagamot na mag-alok ng diagnostic na pamamaraan. Ngayon, ang situ hybridization ay maaaring magamit upang masuri ang isang malaking proporsyon ng mga chromosomal aberrations, ngunit hindi sa lahat ng paraan. Samakatuwid, ang situ hybridization ay hindi dapat gumanap nang mag-isa, ngunit dapat palaging gamitin kasabay ng isang maginoo na pagsubok ng chromosome. Ang pangangalaga sa buntis ay may pangunahing papel sa pamamaraang ito. Samakatuwid, bago ang pagtatasa, ang isang masusing talakayan sa pamamaraang diagnostic ay nagaganap kasama ang umaasang ina, na ipinaalam sa kanya ang tungkol sa mga panganib, mga posibilidad, at mga limitasyon ng pamamaraan.
